ALPHA（Amplified Luminescence Proximity Homogeneous Assay）是一种基于微珠的高聪敏度均相检测技艺。与 HTRF 技艺同样，ALPHA 技艺适用于药物发现阶段的高通量筛选，属于免洗的免疫检测技艺，已在国表里药物研发企业和科研院所中得到鄙俗认同。本文将简要先容 ALPHA 技艺的旨趣、技艺特色、眷属及主要利用、多重检测以及使用细隐衷项。
一、Alpha 基快活趣
Alpha 技艺使用供体和受体两种微珠。当麇集于供体微珠上的分子 A 与麇集于受体微珠上的分子 B 互相作用，且两个微珠距离满盈接近（<200nm）时，简略检测启程光信号。供体微珠名义的光敏剂经 680nm 的激光映照后被引发，将周围的氧更正为单线态氧。单线态氧在溶液中扩散，遭受受体微珠后可在受体微珠内引发一系列级联放大的化学响应，并最终辐射出光。若分子 A 与分子 B 不发生互相作用，则供体微珠产生的单线态氧不会到达受体微珠，从而不会引发化学发光响应。
二、Alpha 技艺特色
均相检测：无需洗涤智商，操作方便。
较宽检测范围：相宜 nM 至 μM 范围的亲和力检测。
低配景、高聪敏度：可幸免环境身分的自愿荧光配景侵扰。
更相宜生物分子检测：有用距离可达 200nm。
更多检测因子：相宜更多的因子检测。
可用于微量检测：样品用量可低至 5 微升。
易于自动化检测：相宜 96、384 和 1536 微孔板规格。
多重检测：可用于多重因子同期检测。
与 ELISA 比拟，AlphaLISA 在洗板、践诺智商、微孔板规格、自动化进程、践诺通量、样品量、聪敏度、检测范围和性价比等方面具有泄漏上风，何况不错进行多重检测。
三、Alpha 眷属及主要利用
Alpha 微珠类型
Alpha 微珠分为供体微珠（Donor Bead）和受体微珠（Acceptor Bead）。在 Alpha 技艺中，供体微珠换取，经激光引发后可产生单线态氧分子。受体微珠字据辐射波长不同分为四种类型：AlphaScreen（红荧烯，辐射波长 520 - 620nm）、AlphaLISA（铕 Eu，辐射波长 615 - 623nm）、AlphaPlex 545（铽 Tb，辐射波长 515 - 555nm）和 AlphaPlex 645（钐 Sm，辐射波长 645nm）。
AlphaScreen 和 AlphaLISA
AlphaScreen 是第一代 Alpha 技艺，受体微珠辐射波长为连气儿的 520 - 620nm 波段。
AlphaLISA 是升级后的技艺，受体微珠辐射波长十分窄，峰值在 615nm 近邻，可幸免好多侵扰身分，缩短假阳性和假阴性。现在，AlphaLISA 居品已替代 AlphaScreen 的大部分居品。AlphaLISA 技艺主要利用于卵白与卵白互相作用（PPI）、激酶和表不雅遗传学盘考的生化筛选、第二信使检测（GPCR）以及生物象征物检测（Cytokine、Biomarker）等范围。在细胞因子检测中，AlphaLISA 提供 Biotin-Free 版块的检测试剂盒，缩短细胞培养环境中生物素对检测效劳的侵扰。AlphaLISA 还提供双重检测的试剂盒。
Alpha Surefire 和 Alpha Surefire Ultra
在盘考信号通路的磷酸化卵白检测中，需使用 Alpha Surefire 系列居品。Alpha Surefire Ultra 版块进行了两个更新缠绵：承袭专利的 CaptSure 技艺替代早期版块的 Protein A 流畅结构，提高抗体拿获的特异性；改用 AlphaLISA 受体微珠，具有更好的光谱秉性。现在，AlphaLISA Surefire Ultra 技艺主要用于信号分子的总卵白和磷酸化卵白检测。
四、Alpha 技艺的多重检测
Alpha 技艺提供三种辐射波长的受体微珠，表面上可同期进行三种分子的检测，但酌量酶标仪确立身分，现在大宽敞情况下只可同期进行两种分子的检测。
AlphaLISA 的双重检测
Alpha 技艺一般承袭包被 Eu 的受体微珠，关于部分生物象征物的检测，也提供 Tb 包被的受体微珠检测试剂盒（AlphaPlex），可在一个微孔板孔内检测两种细胞因子。
Alpha Surefire Ultra 的双重检测
针对检测卵白的种类不同，分为两种情况：
归并个靶点的总卵白和磷酸化卵白检测推选使用 MPSU 版块（Alpha SureFire Ultra Multiplex），提供套装试剂盒，可同期检测总卵白及特定磷酸化卵白的含量变化。
不同靶点的磷酸化卵白检测需诀别购买两种 Surefire Ultra 试剂盒，即 Alpha Surefire Ultra kit（ALSU）和 Terbium SureFire Ultra kit（TBSU），可在一个孔内同期检测不同卵白的磷酸化水平。现在，Alpha 提供 30 余种 TBSU 的检测试剂盒，可与 ALSU 搭配使用。特别辅导，TBSU 试剂盒不成单独使用。
五、Alpha 技艺使用细隐衷项
践诺经由中部分智商需避光，尽量保捏恒温。
初度使用时，尽量按照讲明书的操作智商进行践诺。
微珠试剂不要冷冻保存。
践诺前请先阐明酶标仪的功能和确立。
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